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病毒灭活能力试验悬液该怎么制备?

发布时间:2021-04-28      点击次数:183
  病毒灭活能力试验是一种十分重要的试验过程,做病毒的杀灭效果试验检测,首先需要根据具体的产品具体的病毒灭活分析,病毒灭活效果验证,要找可靠具备CMA资质认证的病毒杀灭试验检测中心机构。--广东省华微检测股份有限公司。
  病毒灭活能力试验的病毒悬液制备方法?
  1、从液氮中取出冷冻的测试宿主细胞,在37°C的温水中迅速融化,并使用毛细管吸管将其移植到细胞中含维护溶液的细胞管中,移液几次以混合,立即离心(3000r/min,3min),并除去上清液。然后添加适当的细胞维持溶液,移液几次以混合,然后如上所述离心后,转移到含有10种培养基的培养瓶中。每天观察细胞生长,并在单层细胞过度生长时将其用于消毒测试。
  2、取出冷冻保存的测试病毒种类,在37°C水浴中融化,用细胞维持液稀释10倍,然后接种到已生长有单层细胞的细胞瓶中,将其置于37°C的培养箱中,使其吸附并与细胞一起生长。每天观察病变,并在3/4个细胞病变时收获病毒。
  3、用声波(或反复冷冻和融化)破坏含病毒的培养基中的宿主细胞,并在冰浴中破坏宿主细胞以释放病毒。然后,尽快离心(6000r/min,15min)以除去沉淀物(主要是细胞碎片),上清液即为所需的病毒悬液。每管装1.0份等分试样到无菌离心管(1.5)中。
  4、取病毒悬液,并根据病毒滴度确定方法确定病毒滴度。将其余的冷冻并储存在-80℃下以备后用。
 

病毒灭活能力试验

 

  病毒灭活能力试验的三种原理:
  1、包膜的破坏:包膜中含有脂质,因此包膜的病毒可以被脂质溶剂快速破坏,例如氯仿或脱氧胆酸钠可以使它失活病毒。实际上,病毒对脂质溶剂的敏感性可用于检查病毒是否具有包膜。诸如渗透压变化,冻结和解冻,热量和干燥之类的物理因素可能会损坏外壳。一般认为,呼吸道感染病毒对干燥的抵抗力较弱,并且传播主要是直接的人感染,这是由于包膜引起的。
  2、病毒蛋白质变性:可使蛋白质变性的化学试剂可以使病毒失活,例如酚,次氯酸盐,酸和碱等。。加热引起的变性也是一种有效的灭活方法。一般而言,该病毒对热的抵抗力较弱,并且在60°C的几分钟内,该病毒的传染性显着降低。因此,当分离出病毒时,从患者身上采集的标本需要在低温下保存,并迅速送到实验室,并在-80下保存以进行长期保存。低于°C的低温条件。
  3、病毒核酸损伤:诸如y射线之类的电离辐射会切断核酸,紫外线会导致核苷酸链上相邻的嘧啶碱基形成二聚体,从而破坏病毒基因的功能。另外,染料如as啶橙或中性红可以与病毒核酸结合,暴露于光下可以分解核酸并使灭活的浆果失活。
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