病毒灭活试验步骤是怎样的？

　　病毒灭活试验是用细胞感染法测定消毒因子作用前后（或对照组与实验组）样本中病毒的量。以细胞病变作为判断指标，确定各组病毒的感染滴度，观察消毒因子对病毒的灭活效果。那么这个试验步骤是怎样的？
 

　　

　　1、悬液法病毒灭活试验

　　

　　（1）取待测消毒剂，用灭菌硬水稀释至所需浓度的1.25倍，于20℃±1℃水浴中备用。

　　

　　（2）病毒悬液的制备：取出-80℃低温保存的病毒，室温解冻后，与有机干扰物按照1:1比例混合作为消毒剂灭活试验用病毒悬液。

　　

　　（3）消毒试验：取上述病毒悬液1份加入4份待检消毒剂，立即混匀并记时。作用至规定时间，立即取出0.1mL，加入经鉴定合格的0.9mL中和剂中混匀；或用经鉴定合格的除药方法处理。

　　

　　（4）对照组试验：阳性对照组为病毒对照组，观察病毒生长是否良好，病毒滴度是否达到试验要求；阴性对照组用细胞维持液作为阴性对照，观察有无污染，细胞生长是否良好。

　　

　　（5）以上各组按照终点稀释法分别进行病毒滴度测定。试验重复3次。

　　

　　（6）终点稀释法：用细胞维持液对待滴定样本做10倍系列稀释，吸取样液100μL，接种于单层细胞培养板上，每个滴度接种4孔。在36℃±1℃放置1h～2h后，取出培养板，更换细胞维持液。继续放入二氧化碳培养箱中（36℃±1℃,5%±1%二氧化碳）培养3-4天，显微镜下观察细胞生长状态，记录细胞病变情况。

　　

　　2、载体法病毒灭活试验

　　

　　（1）取待测消毒剂，置于20℃±1℃水浴中备用。

　　

　　（2）病毒载体的制备：取灭菌载体片，滴染病毒晾干备用。

　　

　　（3）消毒试验：取病毒载体置于消毒因子，作用至规定的时间后取出放入经鉴定合格的中和剂或洗脱液1.0mL中，作用10min,混匀洗脱。消毒器械载体布点应置于杀灭部位，具体方法参照《消毒技术规范》。

　　

　　（4）对照组试验：阳性对照组为病毒对照组，观察病毒生长是否良好，病毒滴度是否达到试验要求；阴性对照组用细胞维持液作为阴性对照，观察有无污染，细胞生长是否良好。

　　

　　（5）以上各组按照终点稀释法分别进行病毒滴度测定。试验重复3次。

　　

　　（6）终点稀释法：用细胞维持液对待滴定样本做10倍系列稀释，吸取样液100μL，接种于单层细胞培养板上，每个滴度接种4孔。在36℃±1℃放置1h～2h后，取出培养板，更换细胞维持液。继续二氧化碳培养箱中（36℃±1℃,5%±1%二氧化碳）培养3-4天，显微镜下观察细胞生长状态，记录细胞病变情况。