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病毒灭活试验步骤是怎样的?

发布时间:2022-12-07      点击次数:100
  病毒灭活试验是用细胞感染法测定消毒因子作用前后(或对照组与实验组)样本中病毒的量。以细胞病变作为判断指标,确定各组病毒的感染滴度,观察消毒因子对病毒的灭活效果。那么这个试验步骤是怎样的?
 
  

病毒灭活试验
 

 

  1、悬液法病毒灭活试验
  
  (1)取待测消毒剂,用灭菌硬水稀释至所需浓度的1.25倍,于20℃±1℃水浴中备用。
  
  (2)病毒悬液的制备:取出-80℃低温保存的病毒,室温解冻后,与有机干扰物按照1:1比例混合作为消毒剂灭活试验用病毒悬液。
  
  (3)消毒试验:取上述病毒悬液1份加入4份待检消毒剂,立即混匀并记时。作用至规定时间,立即取出0.1mL,加入经鉴定合格的0.9mL中和剂中混匀;或用经鉴定合格的除药方法处理。
  
  (4)对照组试验:阳性对照组为病毒对照组,观察病毒生长是否良好,病毒滴度是否达到试验要求;阴性对照组用细胞维持液作为阴性对照,观察有无污染,细胞生长是否良好。
  
  (5)以上各组按照终点稀释法分别进行病毒滴度测定。试验重复3次。
  
  (6)终点稀释法:用细胞维持液对待滴定样本做10倍系列稀释,吸取样液100μL,接种于单层细胞培养板上,每个滴度接种4孔。在36℃±1℃放置1h~2h后,取出培养板,更换细胞维持液。继续放入二氧化碳培养箱中(36℃±1℃,5%±1%二氧化碳)培养3-4天,显微镜下观察细胞生长状态,记录细胞病变情况。
  
  2、载体法病毒灭活试验
  
  (1)取待测消毒剂,置于20℃±1℃水浴中备用。
  
  (2)病毒载体的制备:取灭菌载体片,滴染病毒晾干备用。
  
  (3)消毒试验:取病毒载体置于消毒因子,作用至规定的时间后取出放入经鉴定合格的中和剂或洗脱液1.0mL中,作用10min,混匀洗脱。消毒器械载体布点应置于杀灭部位,具体方法参照《消毒技术规范》。
  
  (4)对照组试验:阳性对照组为病毒对照组,观察病毒生长是否良好,病毒滴度是否达到试验要求;阴性对照组用细胞维持液作为阴性对照,观察有无污染,细胞生长是否良好。
  
  (5)以上各组按照终点稀释法分别进行病毒滴度测定。试验重复3次。
  
  (6)终点稀释法:用细胞维持液对待滴定样本做10倍系列稀释,吸取样液100μL,接种于单层细胞培养板上,每个滴度接种4孔。在36℃±1℃放置1h~2h后,取出培养板,更换细胞维持液。继续二氧化碳培养箱中(36℃±1℃,5%±1%二氧化碳)培养3-4天,显微镜下观察细胞生长状态,记录细胞病变情况。
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