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病毒灭活试验病毒悬液该如何制备?

发布时间:2022-12-22      点击次数:75
  病毒灭活是指用物理或化学手段杀死病毒,但是不损害它们体内有用抗原的方法。灭活病毒,会使病容毒蛋白的结构受到破坏,蛋白不再有生理活性,所以失去感染,致病和繁殖能力,但是常规的灭活不影响病毒蛋白的一级结构,意思就是病毒蛋白的序列没有变化。系统对抗原的识别分成两种,一种是构像表位,一种是线性表位。构象表位意思就是蛋白的三维结构,而线性表位就是蛋白的序列一级结构。T细胞只需要识别线性表位就成接受呈递细胞给出的信号,引发反应。所以灭活的病毒具有抗原性,但失去感染力。灭活的病毒失去感染活性,但仍有融合活性,用于动物细胞工程中的细胞融合的诱导剂。
  
 

病毒灭活试验

 
 

  病毒灭活试验病毒悬液的制备:
  
  1、从液氮中取出冻存的试验用宿主细胞,在37°C温水中迅速融化,用毛细吸管移植于含有细胞维持液的细胞管内,吹吸数次,使混匀,立即离心(3000r/min,3min),去上清液。再加入适当的细胞维持液,吹吸数次,使混匀,同上离心后,转种于加有10培养基的培养瓶中。逐日观察细胞生长情况,在细胞长满单层时,用于消毒试验。
  
  2、取出低温冻存的试验病毒毒种,37°C水浴融化,用细胞维持液作10倍稀释,然后接种于已经长满单层细胞的细胞瓶内,置37°C温箱中,使与细胞吸附、生长。逐日观察病变,待3/4细胞出现病变时,收获病毒。
  
  3、将含病毒及宿主细胞的培养液,在冰浴条件下,用超声波(或反复冻融)破碎宿主细胞,释放病毒。然后,尽快离心(6000r/min,15min)去除沉淀(主要为细胞碎片),上清液即为所需的病毒悬液。按每管1.0分装于无菌离心管(1.5)中。
  
  4、取1支病毒悬液,按病毒滴度测定法,测定其病毒滴度。其余均冷冻保存于-80°C备用。
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